دوره 21، شماره 1 - ( علوم پیراپزشکی و بهداشت نظامی- بهار- 1404 )                   جلد 21 شماره 1 صفحات 21-14 | برگشت به فهرست نسخه ها

XML English Abstract Print

Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Bagheri A, Dini Talatappeh H, Hosseini Rouzbahani N, Ghorban K, Gholami M, Dadmanesh M et al . Development and Preliminary Validation of a Universal One-Step RT-PCR Assay Targeting the 5′-UTR for Pan-Enterovirus Detection. Paramedical Sciences and Military Health 2026; 21 (1) :14-21
URL: http://jps.ajaums.ac.ir/article-1-525-fa.html
باقری علی، دینی طلاتپه حسین، حسینی روزبهانی نگین، قربان خدایار، غلامی محمد، دادمنش مریم و همکاران.. راه‌اندازی و اعتبارسنجی اولیه یک آزمون universal یک مرحله‌ای RT-PCR با هدف‌گیری ناحیه ۵′-UTR برای تشخیص پان- انتروویروس‌ها. علوم پیراپزشکی و بهداشت نظامی. 1404; 21 (1) :14-21

URL: http://jps.ajaums.ac.ir/article-1-525-fa.html

راه‌اندازی و اعتبارسنجی اولیه یک آزمون universal یک مرحله‌ای RT-PCR با هدف‌گیری ناحیه ۵′-UTR برای تشخیص پان- انتروویروس‌ها
علی باقری1 ، حسین دینی طلاتپه2 ، نگین حسینی روزبهانی3 ، خدایار قربان4 ، محمد غلامی*5 ، مریم دادمنش6 ، مهتاب نوری فرد6
1- بیمارستان گلستان، دانشگاه علوم پزشکی آجا،تهران،ایران.
2- مرکز تحقیقات بیماری‌های عفونی، دانشگاه علوم پزشکی آجا، تهران، ایران.
3- مرکز تحقیقات بیماری‌های عفونی، دانشگاه علوم پزشکی آجا، تهران، ایران و گروه ایمونولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی آجا، تهران، ایران.
4- مرکز تحقیقات بیماری‌های عفونی، دانشگاه علوم پزشکی آجا، تهران، ایران. و گروه ایمونولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی آجا، تهران، ایران.
5- مرکز تحقیقات بیماری‌های عفونی، دانشگاه علوم پزشکی آجا، تهران، ایران. ، Mohammadg19@gmail.com
6- مرکز تحقیقات بیماری‌های عفونی، دانشگاه علوم پزشکی آجا، تهران، ایران. و گروه عفونی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی آجا، تهران، ایران.
چکیده:   (15 مشاهده)

مقدمه: انتروویروس‌های انسانی )EVs(عامل اصلی مننژیت آسپتیک، آنسفالیت، بیماری‌های شبه‌سپسیس نوزادی و بیماری دست، پا و دهان هستند که بیش از ۱۰۰ سروتیپ آن‌ها در ۱۵ گونه طبقه‌بندی شده‌اند. تشخیص سریع و حساس برای مدیریت بالینی و کنترل شیوع حیاتی است، اما وابستگی به کیت‌های تشخیصی وارداتی در محیط‌های محدود از نظر منابع مانند ایران، چالش‌برانگیز باقی مانده است. هدف این مطالعه، طراحی، بهینه‌سازی و اعتبارسنجی اولیه یک آزمون universal  یک مرحله‌ای RT-PCR با هدف‌گیری ناحیه بسیار حفاظت‌شده ۵′-untranslated (۵′-UTR) ژنوم EV برای تشخیص طیف وسیع تمامی گونه‌های انتروویروس انسانی بود.
مواد و روش‌ها: تعداد ۱۲۰ توالی ژنومی کامل EV (شامل انتروویروس A–D و راینوویروس‌های نماینده) از بانک ژن GenBank بازیابی شد. هم‌ترازی چندتوالی با استفاده از نرم‌افزار MEGA X برای شناسایی نواحی حفاظت‌شده انجام شد. پرایمرهای universal  با استفاده از نرم‌افزار Oligo7  طراحی و به صورت in silico  از طریق Primer-BLAST در برابر پایگاه داده نوکلئوتیدی NCBI اعتبارسنجی شدند. پرایمرها توسط شرکت پیشگام (تهران، ایران) سنتز شدند. آزمون با استفاده از کیت تجاری one-step RT-PCR (بیورابیت، ایران) بهینه‌سازی و با استفاده از واکسن خوراکی پولیو (سویه سابین) به عنوان کنترل مثبت اعتبارسنجی شد. اختصاصیت توسط الکتروفورز ژل آگاروز و غربالگری تقاطعی in silico  ارزیابی شد.
یافته‌ها: جفت پرایمر طراحی‌شده قطعه‌ای ۱۱۰ جفت‌بازی را در ناحیه ۵′-UTR تکثیر کرد. تحلیل in silico  پوشش ۱۰۰ درصدی برای تمام انواع اصلی EV را بدون واکنش متقاطع با DNA ژنومی انسان یا پاتوژن‌های نامرتبط تأیید کرد. اعتبارسنجی آزمایشگاهی با استفاده از RNA پولیوویروس، یک باند واضح و مجزا با اندازه مورد انتظار را روی ژل آگاروز ۲ درصد نشان داد، در حالی که کنترل‌های منفی فاقد باند بودند.

نتیجه‌گیری: ما یک آزمون RT-PCR universal قوی، مقرون‌به‌صرفه و بومی را گزارش می‌کنیم که قادر به تشخیص انتروویروس‌های انسانی متنوع است. این پلتفرم زیرساختی برای یک کیت تشخیصی تولید داخلی و قابل‌دسترس مناسب برای کاربردهای بالینی و سلامت عمومی در ایران و محیط‌های مشابه فراهم می‌کند.

واژه‌های کلیدی: انتروویروس، کیت تشخیصی، RT-PCR، ۵′-UTR، پرایمر universal، تشخیص مولکولی.
     
نوع مطالعه: پژوهشي | موضوع مقاله: مقالات کامل
دریافت: 1405/2/19 | پذیرش: 1405/5/12 | انتشار: 1404/12/19
ارسال نظر درباره این مقاله : نام کاربری یا پست الکترونیک شما:
CAPTCHA
ارسال پیام به نویسنده مسئول

بازنشر اطلاعات
Creative Commons License این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است.

کلیه حقوق این وب سایت متعلق به علوم پیراپزشکی و بهداشت نظامی می باشد.

© 2015 All Rights Reserved | Paramedical Sciences and Military Health