fa بررسی بیان پروتئین‌های P16 و DAPK در رده‌ی سلولی لوسمیک HL60 در مجاورت با آلکالوئید گیاهی مقالات کامل full articles پژوهشي Research <p dir="RTL" style="margin-right: -2.25pt; text-align: justify;"><strong>مقدمه:</strong> تغییرات اپی&shy;ژنتیک و از آن جمله متیلاسیون <span dir="LTR">DNA</span> در ناحیه پروموتور ژن‌های سرکوبگر تومور به عنوان یکی از مهم‌ترین مکانیسم&shy;های ایجاد بدخیمی&shy;های خونی مطرح است. امروزه استفاده از مواد طبیعی که دارای اثر هایپومتیلاسیون بر <span dir="LTR">DNA</span> می&shy;باشند مورد توجه فراوان قرار گرفته است. <span dir="LTR">Harmine</span> یکی از آلکالوئیدهای مشتق از گیاه اسپند است که دارای خاصیت هیپومتیله کنندگی و ضدتکثیری بر روی رده &shy;های سلولی لوسمیک می&shy;باشد. از آنجائی که ژن‌های <span dir="LTR">P16</span> و <span dir="LTR">DAPK</span> بعنوان ژن‌های سرکوبگر تومور در برخی بدخیمی&shy;های خونی بصورت هایپرمتیله می&shy;باشند، لذا در این مطالعه تأثیر آلکالوئید گیاهی <span dir="LTR">Harmine</span> بر تکثیر رده سلولی <span dir="LTR">&nbsp;HL60</span> و بیان این دو ژن در این رده سلولی بررسی شد تا گامی در جهت روشن شدن مکانیسم اثر این داروی گیاهی و استفاده از مواد طبیعی در درمان سرطان&shy;های خون برداشته شود.</p> <p dir="RTL" style="margin-right: -2.25pt; text-align: justify;"><strong>مواد و روش‌ها:</strong> رده سلولی لوسمیک <span dir="LTR">&nbsp;HL-60</span> در فلاسک حاوی محیط کشت <span dir="LTR">RPMI</span>، سرم جنینی گوساله، پنی‌سیلین و استرپتومایسین در دمای 37 درجه و دی اکسید کربن 5 درصد به مدت 5 روز کشت داده شد. تأثیر غلظت&shy;های مختلف <span dir="LTR">Harmine</span> &nbsp;بر تکثیر سلولی در مقایسه با <span dir="LTR">5-azacytidine</span> به روش دستی و با استفاده از لام نئوبار و رنگ تریپان بلو در ساعات مختلف 24 ساعت ، 48 ساعت و 72 ساعت تعیین گردید. بیان ژن‌های <span dir="LTR">P16</span> و <span dir="LTR">DAPK</span> پس از ساخت <span dir="LTR">cDNA</span> و طراحی پرایمرهای اختصاصی در سایت <span dir="LTR">NCBI</span>، با روش <span dir="LTR">Real-time PCR</span> بررسی شد. آنالیز آماری داده&shy;ها با نرم افزار <span dir="LTR">SPSS</span> انجام گرفت.</p> <p dir="RTL" style="margin-right: -2.25pt; text-align: justify;"><strong>یافته &shy;ها:</strong> نتایج بدست آمده نشان داد که <span dir="LTR">Harmine</span> در تمامی غلظت&shy;ها موجب کاهش تکثیر سلولی می‌شود. بطوری که <span dir="LTR">Harmine</span> در غلظت&shy;های <span dir="LTR">g/ml</span>&micro; <span dir="LTR">25.6</span> و <span dir="LTR">102.4</span> و پس از 72 ساعت ، تکثیر سلولی را در مقایسه با نمونه کنترل به ترتیب به میزان50 و 78 درصد &nbsp;کاهش داد (<span dir="LTR">p<0.001</span>). همچنین <span dir="LTR">Harmine</span> موجب افزایش بیان<span dir="LTR">DAPK </span>&nbsp;می‌شود اما این افزایش به لحاظ آماری فقط در غلظت <span dir="LTR">g/ml</span>&micro; <span dir="LTR">102.4</span> و فقط در مورد <span dir="LTR">DAPK </span>&nbsp;معنی دار است (<span dir="LTR">p<0.005</span>).</p> <p dir="RTL" style="margin-right: -2.25pt; text-align: justify;"><strong>بحث و نتیجه&shy; گیری: </strong>نتایج این مطالعه نشان داد که<span dir="LTR">Harmine </span>&nbsp;دارای خاصیت ضدتکثیری وابسته به دوز و زمان بر روی رده سلولی لوسمیک<span dir="LTR">HL60</span> است. همچنین <span dir="LTR">Harmine</span> موجب افزایش بیان<span dir="LTR">DAPK </span>&nbsp;می‌شود که این مسئله با توجه به نتایج دیگر مطالعات می&shy;تواند ناشی از هایپومتیله شدن پروموتور این ژن باشد. مطالعات بیشتر جهت روشن&shy;تر شدن مکانیسم اثر <span dir="LTR">Harmine</span> بر سلول‌های سرطانی لازم است.</p> <p style="text-align: justify;"><strong>Introduction:</strong> Epigenetic changes such as promoter methylation of tumor suppressor genes (TSGs) is one of the most important mechanisms involved in the development of hematologic malignancies. Harmine is one of the Harmal-derived alkaloids with anti-proliferatory effects on leukemia cell lines. Since P16 and DAPK genes are hypermethylated in some hematologic malignancies, the current study aimed to investigate the effect of Harmine on the expression of these two genes in HL60 Leukemia cell line to take steps towards clarifying the mechanism of it&rsquo;s anti-proliferatory effect.</p> <p style="text-align: justify;"><strong>Methods and Materials:</strong> HL60 cells were seeded into 96 well plates containing RPMI medium supplemented with 10% FBS, 1% penicillin or streptomycin, and then incubated at 37&deg;C in a humid environment at 5% CO2. Cell count and viability were determined after 24, 48, and 72 hours in the presence of Harmine and 5-azacytidine. Gene expression analysis was performed by quantitative real time PCR. Finally, statistical analysis was carried out using SPSS software.</p> <p style="text-align: justify;"><strong>Results:</strong> Based on the results, Harmine suppresses cell proliferation in all concentrations. Comparing the control group, Harmine at 25.6 &micro;g/ml and 102.4 &micro;g/ml concentrations reduces cell proliferation to 50 and 78 percent at 72 hours, respectively (P<0.001). The results demonstrate that Harmine at 102.4 &micro;g/ml concentration significantly upregulates DAPK expression (P<0.005). However, its effect was not significant on p16 expression (P>0.05).</p> <p style="text-align: justify;"><strong>Discussin and Conclusion:</strong> The results indicate that Harmine have inhibitory effect on HL60 leukemia cell line in a dose and time-dependent manner. Furthermore, Harmine can induce DAPK upregulation that might be related to DAPK gene hypomethylation. Further comprehensive and elucidative investigations are needed for better understanding of the Harmine effect on leukemic cells.</p> <p style="text-align: justify;"></p> Harmine , HL60, P16, DAPK HL60, Harmine, P16, DAPK 28 33 http://jps.ajaums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-44&slc_lang=fa&sid=1 Ali Noroozi Aghide علی نوروزی عقیده 1003194753284600262 1003194753284600262 No AJA university of Medical Sciences دانشگاه علوم پزشکی آجا Hamed Soleimani Samarkhazan حامد سلیمانی ثمرخزان 1003194753284600263 1003194753284600263 No Tehran university of Medical Sciences دانشگاه علوم پزشکی تهران Moharam Ahmadnezhad محرم احمدنژاد moharram.ahmadnejad@yahoo.com 1003194753284600264 1003194753284600264 Yes Blood Transmission Organization سازمان انتقال خون ایران