Paramedical Sciences and Military Health

fa طراحی روشPCR بهینه شده جهت ردیابی ژن بتالاکتاماز وسیع الطیف نوع SHV Design of Optimized PCR Method for Detection of SHV Type ESBL Genes چکیده مقالات article abstracts پژوهشي Research مقدمه: بتالاکتامازهای وسیع الطیف یکی از عوامل بسیار مهم مقاومت های آنتی بیوتیکی محسوب میشود مقاومت آنتی بیوتیکی در دهه اخیر به عنوان معضل جهانی مطرح گردیده است و دارای آمار مرگ و میر و تلفات بسیاری در سطح جهانی می باشد. بتالاکتامازهای وسیع الطیف یکی از مهمترین نوع شایع در مقاومت آنتی بیوتیکی می باشد.لذا تشخیص سریع و دقیق آن می تواند به منزله گامی بزرگ در حل این مشکل باشد. در این مطالعه هدف بررسی ژن SHV از بتالاکتامازهای وسیع الطیف با تست PCR است. مواد و روشها: ژن SHV از بانک ژنی استخراج و تراز وسط قرار داده شد. پرایمرهای اختصاصی PCR باتوجه به اجماع از ژن SHV طراحی شده بودند. یک پلاسمید حاوی کنترل مثبت ژن با استفاده از PCR و روش شبیه سازی ساخته شده است. ویژگی آزمایش با استفاده از DNA بروسلا ژنومی و یک پنل متشکل از ژنوم های موجودات 10 گرم مثبت و 10 گرم منفی مورد بررسی قرار گرفت. تست PCR با محصولات بسیار خاص و بدون محصولات تقویت کننده از ارگانیسم غیر SHV مشاهده شد. تست های دیگر از این ویژگی نیز با استفاده از CTX-M و بتالاکتاماز TEM مورد بررسی قرار گرفتند. نتایج: در الکتروفورز محصول PCR باندی به طول bp199 مطابق با طول توالی مدنظر رویت شد. نمایش قطعه مشابه در PCR پلاسمید نوترکیب محصول شبیه سازی شده حاوی ژن SHV را تایید می کند. زمانی که پلاسمید بر PCR –SHV قرار گرفت، یک الگوی نردبانی بر روی ژل آگارز مشاهده شد. الگو هرگز در گروه کنترل مشاهده نشد. نتایج حاصل از آزمایش نشان داد که آغازگر به طور جداگانه برای ژن SHV بود. بحث و نتیجه گیری: نتایج این مطالعه نشانگر این موضوع بود که تست PCR طراحی شده روشی آسان، سریع و ارزان در بررسی بتالاکتاماز وسیع الطیف نوع SHV میباشد. Introduction: ESBL is an important factor in antibiotic resistance. Antibiotic resistance has been proposed as a global problem in recent decades and it causes many deaths all over the world; therefore, rapid and accurate diagnosis can be major step in solving this problem. This study aimed to identify SHV-type gene with PCR method. Methods and Materials: SHV gene sequences were extracted and aligned from Genbank. Specific PCR primers were designed according to the consensus of the SHV genes. A plasmid containing positive control of the gene was created by using PCR and cloning methods. The assay specificity was evaluated using Brucella genomic DNA and a panel containing genomes of 10 gram-positive and gram-negative organisms. The PCR assay was highly specific and no amplification products were observed from the non-SHV organisms, an other test of the specifity was done by the use of CTX-M and TEM betalactamases. Results: A band with a the length of 199bp was indicated in the agarose gel electrophoresis of the PCR product in accordance with the desired sequence. Showing the same fragment in PCR confirmed the recombinant plasmid of coloning product containing the SHV gene. When the plasmid was subjected to the SHV-PCR, a ladder-like pattern was visualized on the agarose gel. The pattern has never observed in the case of negative controls.The results of specify assay conveyed that primers were separately for SHV gene. Discussion and Conclusions: The results of this study indicated that PCR assay is a simple, rapid, sensitive and specific technique for detection of SHV gene that may improve diagnostic potential in clinical laboratories. بتالاکتاماز وسیع الطیف ,SHV,PCR Betalactamases, SHV, PCR 32 36 http://jps.ajaums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-37-1&slc_lang=fa&sid=1 Neda Gharagozloo Hesari ندا قراگوزلو حصاری n.gharagozlue@gmail.com 1003194753284600218 1003194753284600218 No Islamic Azad University of Qom دانشگاه آزاد اسلامی واحد قم Keyvan Majidzade کیوان مجیدزاده 1003194753284600219 1003194753284600219 No Brest Cancer Center (BCRC) مرکز تحقیقات سرطان پستان Mohammad Soleimani محمد سلیمانی soleimanidor@yahoo.com 1003194753284600217 1003194753284600217 Yes Islamic Azad University of Qom دانشگاه آزاد اسلامی واحد قم