fa شناسایی آلودگی مایکوپلاسمایی در کشتهای سلولی به روش PCRبا استفاده از پرایمرهای اختصاصی 16S rRNA مقالات کامل full articles پژوهشي Research <p dir="RTL"><strong>مقدمه:</strong> مایکوپلاسماها از مهمترین و جدی ترین آلوده کننده های کشت های سلولی و فرآورده های بیولوژیک تولیدی در کشت های سلولی می باشد. تشخیص مایکوپلاسماها بر پایه کشت و روش های مولکولی می باشد. این روش ها از نظر سرعت، اطمینان، ویژگی و حساسیت با یکدیگر متفاوت هستند. هدف اصلی این مطالعه ردیابی آلودگی های مایکوپلاسمایی در نمونه های کشت با استفاده از پرایمرهای اختصاصی <span dir="LTR">16S rRNA</span>&nbsp;براساس تکنیک <span dir="LTR">PCR</span> می باشد.</p> <p dir="RTL"><strong>مواد و روشها:</strong> توالی ژن <span dir="LTR">16S rRNA</span> گونه های مایکوپلاسمای آلوده کننده کشت های سلولی از بانک ژن استخراج و هم ردیف سازی گردید. پرایمرهای اختصاصی با استفاده از ترادف های بدست آمده، طراحی شد. برای ساخت کنترل مثبت، توالی ژن <span dir="LTR">16S rRNA</span> به روش <span dir="LTR">PCR</span> تکثیر و سپس در وکتور پلاسمیدی کلون شد.</p> <p dir="RTL"><strong>نتایج:</strong> الکتروفورز محصول <span dir="LTR">PCR</span> ژن <span dir="LTR">16S rRNA</span> مطابق انتظار باندی به طول<span dir="LTR">219 bp </span>&nbsp;را بر روی ژل آگاروز نشان داد. این الگو در نمونه های کنترل منفی دیده نشد. همچنین تکثیر قطعه ای به همین اندازه در پلاسمید نوترکیب حاصل، صحت کلونینگ را تایید کرد.</p> <p dir="RTL"><strong>بحث و نتیجه گیری: </strong>این روش با داشتن مزیت هایی مانند سرعت بالا و دقت زیاد از پتانسیل مناسبی برای استفاده در آزمایشگاه های کشت سلول برخوردار است.</p> <p><strong>Introduction:</strong> Mycoplasmas are one of the most serious contaminants of cellular cultures and their biological productions. Mycoplasma diagnosis is conducted on the basis of culture and molecular methods. These methods are different from each other in terms of accuracy, reliability, and sensitivity. This study aimed to trace the mycoplasma contaminations in culture samples using 16S rRNA specific primers based on the PCR method.<br> <strong>Methods and Materials:</strong> 16S rRNA gene sequence of cell culture contaminant mycoplasmas were extracted from gen bank and were sorted using gene sequence pattern. Specific primers were designed using obtained synonymies. To build positive control structure, 16S rRNA gene proliferated based on the PCR methods then cloned in a plasmid vector.<br> <strong>Results:</strong> Electrophorus of PCR product of 16S rRNA revealed a band of 219bp length on Agarose gel. This pattern was not observed in negative control samples. Moreover, the fragment proliferation with the same size in recombinant plasmid confirmed the authenticity of cloning.<br> <strong>Discussion and Conclusion:</strong> Due to its high speed and accuracy, the method has potential for using in cell culture laboratories.</p> مایکوپلاسما, واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) , کشت سلولی Mycoplasma, Cell culture, Polymerase chain reactions (PCR), 13 20 http://jps.ajaums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-51-1&slc_lang=fa&sid=1 zohre soheily زهره سهیلی zsoheily@yahoo.com 1003194753284600389 1003194753284600389 No Department of Microbiology, Islamic Azad University, Qom branch, Qom, Iran گروه میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد قم، قم، ایران Mohammad Soleimani محمد سلیمانی soleimanidor@yahoo.com 1003194753284600390 1003194753284600390 Yes Department of Microbiology, Faculty of Medicine, AJA University of Medical Sciences, Tehran, Iran گروه میکروب شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی آجا، تهران، ایران Keivan Majidzadeh کیوان مجیدزاده soleimanidor@yahoo.com 1003194753284600391 1003194753284600391 No Tasnim Biotechnology Research Center (TBRC), Faculty of Medicine, AJA University of Medical Sciences, Tehran, Iran مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی تسنیم، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی آجا، تهران، ایران