TY - JOUR T1 - A PCR Assay for Detection of Mycoplasma Contamination in Cell Culture by 16S rRNA Specific Primers TT - شناسایی آلودگی مایکوپلاسمایی در کشتهای سلولی به روش PCRبا استفاده از پرایمرهای اختصاصی 16S rRNA JF - ajaums-jps JO - ajaums-jps VL - 12 IS - 2 UR - http://jps.ajaums.ac.ir/article-1-103-fa.html Y1 - 2017 SP - 13 EP - 20 KW - Mycoplasma KW - Cell culture KW - Polymerase chain reactions (PCR) N2 - مقدمه: مایکوپلاسماها از مهمترین و جدی ترین آلوده کننده های کشت های سلولی و فرآورده های بیولوژیک تولیدی در کشت های سلولی می باشد. تشخیص مایکوپلاسماها بر پایه کشت و روش های مولکولی می باشد. این روش ها از نظر سرعت، اطمینان، ویژگی و حساسیت با یکدیگر متفاوت هستند. هدف اصلی این مطالعه ردیابی آلودگی های مایکوپلاسمایی در نمونه های کشت با استفاده از پرایمرهای اختصاصی 16S rRNA براساس تکنیک PCR می باشد. مواد و روشها: توالی ژن 16S rRNA گونه های مایکوپلاسمای آلوده کننده کشت های سلولی از بانک ژن استخراج و هم ردیف سازی گردید. پرایمرهای اختصاصی با استفاده از ترادف های بدست آمده، طراحی شد. برای ساخت کنترل مثبت، توالی ژن 16S rRNA به روش PCR تکثیر و سپس در وکتور پلاسمیدی کلون شد. نتایج: الکتروفورز محصول PCR ژن 16S rRNA مطابق انتظار باندی به طول219 bp را بر روی ژل آگاروز نشان داد. این الگو در نمونه های کنترل منفی دیده نشد. همچنین تکثیر قطعه ای به همین اندازه در پلاسمید نوترکیب حاصل، صحت کلونینگ را تایید کرد. بحث و نتیجه گیری: این روش با داشتن مزیت هایی مانند سرعت بالا و دقت زیاد از پتانسیل مناسبی برای استفاده در آزمایشگاه های کشت سلول برخوردار است. M3 ER -